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cytoskeleton BK165-S說明書
| 簡單 全面的套件可大限度地縮短優化時間，同時大化PTM檢測 質量 的靈敏度和度，可以自信地識別低豐度的PTM 積分 使用相同的系統研究多個PTM
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量
10種檢測方法（Cat。＃BK165-S）
Signal-Seeker™系列產品的開發旨在簡化專家和非專業人士對關鍵調節蛋白修飾的分析。全面的Signal-Seeker™試劑盒提供親和珠系統，可從任何給定的細胞或組織裂解液中分離和富集修飾的蛋白質。然后使用針對靶蛋白的抗體通過標準蛋白質印跡程序分析富集的蛋白質群體。
產品用途包括
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套件內容
SUMOylation 1試劑盒包含以下組分：
| 裂解和蛋白質定量步驟 | IP和預清除步驟 | 洗步驟 | 洗脫步驟 | 西部一步 |
BlastR™裂解緩沖液 BlastR™稀釋緩沖液 BlastR™過濾器 蛋白酶抑制劑雞尾酒 去SUMO化抑制劑雞尾酒 Precision Red™蛋白質分析試劑 | SUMOylation 1 Affinity Beads IP控制珠
| BlastR™洗滌緩沖液
| 旋轉列 珠子洗脫緩沖液
| 化學發光試劑A. 化學發光試劑B. 抗SUMO1抗體
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示例結果
這些套件有很多應用，這里我們描述一個有趣的例子：
應用1：研究重要的SUMOylation 1事件
與舊的SUMO1工具相比，使用Signal-Seeker™SUMOylation 1檢測試劑盒免疫沉淀總SUMO1譜 （A）使用BlastR裂解和過濾系統獲得HAP1野生型（WT）或SUMO1敲除（KO）裂解物。將1mg每種裂解物與40mg每種SUMO1親和試劑一起溫育：ASM11-珠（Cytoskeleton），21C7（Invitrogen純化的），21C7（DSHB-上清液），D11-珠（Santa Cruz）和綴合的SUMO1 IgG對照珠。 （CIG03）。用蛋白G瓊脂糖珠捕獲21C7抗體以富集SUMO-1修飾的蛋白。通過SDS-PAGE分離樣品并轉移至PVDF。使用1：5000的ASM01（Cytoskeleton）抗體和5％牛奶中1：1000的小鼠Trubelot Ultra-HRP二抗，通過蛋白質印跡分析富集的SUMO1樣品。Trueblot secondary用于小化21C7樣品的重鏈和輕鏈檢測。
（B）：使用ASM11進行IP，如圖1A所示。SUMO1修飾的蛋白質用ASM01 1：5000顯示，抗小鼠以1：20,000顯示，以突出在64-30kDa范圍內SUMO化蛋白質的分布，當使用未綴合的抗體時，可能被重鏈和輕鏈干擾掩蓋。 IP。 |
與舊的SUMO1工具相比，使用Signal-Seeker™SUMOylation 1檢測試劑盒免疫沉淀SUMO1修飾的靶蛋白
使用BlastR裂解和過濾系統獲得HAP1野生型（WT）或SUMO1敲除（KO）裂解物。1毫克每裂解物與40孵育米 ASM11珠（細胞骨架），21C7（DSHB上清液），和共軛SUMO1 IgG對照珠（CIG03）：g各自SUMO1親和試劑的。用蛋白G瓊脂糖珠捕獲21C7抗體以富集SUMO-1修飾的蛋白。通過SDS-PAGE分離樣品并轉移至PVDF。靶蛋白：通過蛋白質印跡分析（A）TFII-I，RanGAP1和（B）schmd1的SUMO1修飾形式。抗兔-HRP標記的第二抗體以1：10,000使用。所有三種一抗均為兔多克隆抗體，不應結合來自IP抗體的重鏈和輕鏈片段。
在這一研究領域可以嘗試的其他實驗包括：
•參與調節靶蛋白的SUMOylating和去SUMOylating酶的藥理學研究。
•在各種不同的生長因子或藥物治療下研究SUMO化。
•檢查SUMOylated靶蛋白與其下游效應子的相互作用。
•檢查SUMOylation 1和其他PTM之間對目標蛋白的串擾。
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