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線性PEI MAX 40K轉染說明書

更新時間:2026-04-13      點擊次數:14292


線性PEI MAX 40K轉染說明書

化學名:線性聚乙烯亞胺,線性PEI,聚乙烯亞胺,線性,MW 40000,轉染級  

線性聚乙烯亞胺 分子量40000


訂貨號#: 78PEI40000   規格:100mg 500mg  5g

品牌:BIOHUB                     CAS#: 49553-93-7

分子量: 40,000(~22,000自由基)

溶于:水           不溶于:常用有機溶劑(乙醇,丙酮,四氫呋口南)  

外觀:白色至灰白色自由流動的固體  

處理:手套和通風櫥             儲存:在室溫下避光干燥儲存

PEI MAX 40K(在游離堿中也稱為PEI 22K)是一種功能強大,值得信賴且經濟實惠的瞬時轉染試劑。在HEK293和CHO大多數表達系統中,PEI MAX都能提供穩定的高表達(96孔板至100L生物反應器)。現在每年有更多的研究人員和公司來使用PEI MAX進行細胞轉染,因為相對于大多數轉染試劑而言 PEI MAX既能等到穩定的高表達又能使轉染成本降低少40%。

PEI MAX 比更PEI 25K易于使用,并且比PEI 25K有更高的轉染效率,通常PEI 25K轉染過程通常需要幾個小時才能完成準備,而PEI MAX 40K可在兩小時內完成整個轉染過程。另外,PEI 25K含有4-11%的殘留丙酰基,這可能阻礙聚合物主鏈與DNA的有效結合,而PEI MAX 40K的丙酰基*脫落,意味著PEI MAX每批產品的性能更加穩定。

PEI 25K(KE1075)和PEI MAX 40K(KE1098)的比較

線性PEI MAX 40K轉染說明書

配置:1:稱取100mg PEI MAX,加新鮮的細胞級別的水90ml,攪拌溶解。

2:調整pH值至7.0 ,定容至100ml,用0.22um的濾器過濾,分裝后儲存于4℃,保質期可以達到12個月。

轉染操作流程:

瞬時轉染方法

1. 接種細胞: 轉染前一天,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到 70~80%。

2. 準備 DNA-PEI 復合物: DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。,用 Opti-MEM ITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養基稀釋適量 DNA。用同樣的培養基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1.5-5 μL 線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液 的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如 NEST  5 mL /14 mL 離心管。

3. 轉染細胞: 直接向每個孔中加入 DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養板/培養皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養基,替換成無血清培養基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染 1.5 h 后,添加?體積的包含 30%血清的生長培養基。

4. 孵育細胞和分析結果: 在 CO2培養箱中 37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉染后 5 h 即可檢測到轉入基因的表達。 請自行確定適合檢測時間。


穩定轉染方法

1. 接種細胞: 轉染前一天,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到 70~80%。

2. 準備 DNA-PEI 復合物: DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表 1 所示,用 Opti-MEM ITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養基稀釋適量 DNA。用同樣的培養基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1.5-5 μL 線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如 NEST  5 mL /14 mL 離心管。

3. 轉染細胞: 直接向每個孔中加入 DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養板/培養皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養基,替換成無血清培養基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染 1.5 h 后,添加?體積的包含 30%血清的生長培養基。

4. 孵育細胞和分析結果: 在 CO2培養箱中 37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉染后5h 即可檢測到轉入基因的表達。

5. 轉染 24 h 后,將細胞傳代至新鮮的生長培養基中(將細胞稀釋 10 倍 以上),在 CO2培養箱中 37℃孵育過夜。第二天加入與轉染抗性基因相匹配的篩選藥物。約 1~2 周可 篩選到耐藥性克隆,在這期間需經常更換含篩選藥物的生長培養基。 ?

特別提醒

1. 對于某些類型的細胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 和 COS 細胞,在轉染前兩天鋪板可顯著 提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉染時細胞的匯合度仍為 70~80%。

2. 對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。

3. 即使在有蛋白(如 10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,但是 DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用 Opti-MEM ITM 培養基以達到宜轉染效率。其他的無蛋白培養基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。

4. 對大多數細胞來而言,每 1 μg DNA 使用 3.0 μL PEI MAX轉染試劑都能獲得較高轉染效率。使用 者也可嘗試每 1 μg DNA 使用 1.5~4 μL 體積線性PEI MAX轉染試劑進行優化。

   5.本手冊只是一個基本操作手冊,具體轉染過程中需要根據實驗進行優化,優化方向為混合時間,轉染時間,DNA混合比列
   6.PEI MAX(MW 40,000) 為Polysciences公司生產的化合物產品,每批產品出廠前都經過嚴格的檢測,保證每批產品都*、穩定且高品質,但由于作為轉染試劑使用過程中有很多實驗室因素(配置方法,PH,水純度,稱量的準度,dna RNA純度,細胞狀態,細胞品系…)造成溶解出現問題或者轉染效率出現差異,所以廠家只受理該產品純度,分子量及重量缺失破損等相關投訴,針對極個別客戶溶解問題和轉染效率問題我們只能友善解決,所以不能保證您能獲得滿意答復,對于產品產品轉染效率不高,轉染批間有差異,轉染不了等問題,不作為評價我們售后工作的依據。如果我們提供的PEI手冊都無法解答您的問題,建議您可以多看文獻,多調整一下轉染條件,找出適合自己細胞的轉染方法。如果無暇摸索條件,您也可以直接購買我們配置好細胞轉染液,這樣免去您很多煩惱,謝謝理解



轉染試劑和DNA配比數據

細胞型號

培養基

每孔細胞數

DNA的量

轉染試劑量

和培養基混合 4-6h

293H

DMEM

3×104

0.2µg

0.6µL

DMEM+10%FBS

293FT

DMEM

3×104

0.2µg

0.6µL

DMEM+10%FBS

293E

DMEM

3×104

0.2µg

0.6µL

DMEM+10%FBS

293F

DMEM

3×104

0.2µg

0.6µL

DMEM+10%FBS

COS7

DMEM

1.5×104

0.4µg

0.6µL

DMEM+10%FBS

hela

DMEM

2×104

0.3µg

0.6µL

1640+15%FBS

Caco2

MEM

3.5×104

0.3µg

0.9µL

MEM+10%FBS

BHK21

MEM

2×104

0.2µg

0.6µL

MEM+10%FBS

CHO-DG44

DMEM+HT+pro

2×104

0.5µg

0.6µL

DMEM+HT+pro +10%FBS

RAW264.7

DMEM

3×104

0.2µg

0.6µL

DMEM +10%FBS

MCF7

MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium pyruvat

2×104

0.1µg

0.3µL

MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium pyruvat+10%FBS

SW480

IMDM

3×104

0.4µg

0.6µL

IMDM +10%FBS

MDCK

DMEM

4×104

0.6µg

1.2µL

DMEM+10%FBS

CHO-K1

IMDM+Pro

3×104

0.2µg

0.6µL

IMDM+Pro +10%FBS

HepG2

DMEM

3×104

0.5µg

0.9µL

DMEM+10%FBS

A549

DMEM

2×104

0.3µg

0.6µL

DMEM+10%FBS

NIH/3T3

DMEM

1.5×104

0.1µg

0.9µL

DMEM+10%FBS

vero

DMEM

3×104

0.3µg

0.9µL

DMEM+10%FBS

sf9

SIM SF

5×104

0.4µg

0.9µL

SIM SF+10%FBS


轉染效率

細胞種類

中文名稱

PEI 轉染效率

HEK293

人胚腎細胞

90%-95%

293-T

人胚腎細胞

90%-95%

CHO-K1

倉鼠卵巢細胞

80%-90%

U251

人源神經膠質瘤細胞

80%-90%

Hela

人源宮頸癌細胞

70%-80%

COS7

猴SV40轉化腎細胞

70%-80%

HepG2

人源肝癌細胞

70%-80%

NIH/3T3

小鼠胚胎成纖維細胞

60%-70%

膠質瘤干細胞

人源膠質瘤干細胞

60%-70%

Patu8988

人源胰腺癌細胞

60%-70%

U2OS

人源骨肉瘤細胞

60%-70%






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