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貨號：P7600L
產品描述：
EnzScript™（M-MLV Reverse Transcriptase RNase H minus）是一種RNA依賴性DNA聚合酶，不具有可檢測的RNase H活性。EnzScript™可用于從polyA mRNA或總RNA中產生*鏈cDNA，用于下游應用，如RT-PCR，cDNA克隆或RNA-Seq的文庫構建。RNase H結構域中的點突變增加了酶的熱穩定性，并支持比野生型M-MLV逆轉錄酶（1）更高的全長轉錄產物的cDNA產量。
規格： | 10,000 U |
濃度： | 200,000 U/mL |
純度（SDS-PAGE） | > 99％ |
活性： | ≥ 280,000 U/mg |
SS核酸外切酶 | 2000U <5.0％ |
DS核酸外切酶 | 2000U <1.0％ |
DS內切核酸酶 | 2000U = no conversion |
大腸桿菌 DNA污染 | 2000U <10 copies |
RNAse污染 | 2000U=沒有可檢測到的非特異性RNA酶 |
功能性RT-PCR分析 | 9.4kb cDNA轉錄物的合成 |
蛋白質來源
攜帶Moloney-Murine白血病病毒逆轉錄酶基因的重組大腸桿菌菌株，在RNase H結構域中具有3個點突變，消除了可檢測的RNase H活性。
提供：
20 mM Tris-HCl,
100 mM NaCl,
0.1 mM EDTA ,
1 mM DTT,
0.01% NP-40 Alternative,
50% glycerol,
pH 7.5 @ 25°C.
隨附：
5X M-MLV Reverse Transcriptase RNAse H- Reaction Buffer (B7601) and 100mM DTT (B9060)
單位定義
1單位定義為使用poly r（A）/ oligo（dT）作為底物，在37℃下10分鐘內將1 nmol dTTP摻入酸不溶物質所需的酶量。
分子量
75,938Da
試劑盒組成：
描述 | 貨號 |
EnzScript™ | P7600 |
5X M-MLV Reverse Transcriptase RNase H- Buffer | B7601 |
100 mM DTT | B9060 |
聚合酶屬性
分子量：75.9kDa
*延伸溫度：42℃
RNA酶H活性：未檢測到
單位濃度：200U /μl
轉錄物長度：12.3 kB
常見應用
EnzScript™（M-MLV Reverse Transcriptase RNase H minus）是RNA-依賴性DNA聚合酶，通常用于合成用于RT-PCR擴增，cDNA克隆或RNASeq的First-Strand cDNA。與標準M-MLV RT相比，降低的RNA酶H活性使得全長cDNA轉錄物產量更高（> 5kb）并且熱穩定性更高。
*鏈反應方案
建立*鏈反應，如使用不含核酸酶的水，RNase抑制劑，無RNA酶的試管和帶過濾器的無菌移液吸頭時，應采取防止RNA酶降解模板RNA的一般預防措施。以下程序可用作制備20μlFirst-Strand cDNA反應的指導原則。
材料：
•無菌，無核酸酶水
•引物（oligo dT （15-20） 或 隨機六聚體 或 基因特異性）
•dNTP混合物（dATP，dCTP，dGTP，dTTP）
•RNA模板
•RNA酶抑制劑
過程 ：
1、將以下組分添加到冰上的不含RNase的微量離心管中。對于多個反應，準備一個mastermix。
產品 | 量 |
50μM寡聚dT（15-20）或50μM隨機六聚體或10μM基因特異性引物 | 1至2μl |
5mM dNTP混合物 | 2μl |
RNA模板*（ 1 ng至1μg總RNA 或 1至250 ng mRNA） | Xμl |
無菌，無核酸的水 | 到12ul |
2. 將微量離心管加熱至65℃5分鐘，并在冰上快速冷卻2分鐘以將引物退火至RNA模板。短暫旋管以收集冷凝物。
3. 將以下組分（每個*鏈反應）添加到冰上的微量離心管中：
產品 | 量 |
5X M-MLV逆轉錄酶RNase H-緩沖液 | 4ul |
100mM DTT | 2μl |
核糖核酸酶抑制劑（可選）或無核酸酶水 | 1μl |
200 U EnzScript™ | 1μl |
4.按照以下步驟孵育每個20μl*鏈反應：
1）25℃2分鐘（oligo dT（15-20），基因特異性引物）或25℃10分鐘（隨機六聚體）
2) 42℃30-60分鐘
3）在70°C熱殺15分鐘
5.在下游應用中使用cDNA或在-20°C保存。對于RT-PCR，通常將1至2μl來自First-Strand反應的cDNA作為模板添加到PCR中。可選：在PCR之前去除RNA鏈，向cDNA：RNA雜交體中加入1μlRNA酶H（5U），在37℃孵育20分鐘和65℃孵育10分鐘（熱殺滅）。RNase H治療推薦用于擴增長擴增子（> 5 kB）。
部分產品信息：
貨號 | 品名 | 規格 | 濃度 | 品牌 |
|---|---|---|---|---|
N2070-10-L | ATP Solution | 50 µmol | 10 mM | Enzymatics |
N2050-10-L | 10 mM dNTP Solution Mix | 100 µmol | 10 mM | Enzymatics |
N2010L | 100 mM 75µmol dNTP Solution Set | 75 µmol | 100 mM | Enzymatics |
N2010-A-L | 100 mM dATP Solution | 75 µmol | 100 mM | Enzymatics |
N2050L | 100µmol dNTP Solution Mix | 100 µmol | 25 mM | Enzymatics |
Y9180L | 10x Uracil Cleavage System | 750 Reactions | N/A | Enzymatics |
P7670 | 2x HiFi PCR Master Mix | 1 rxn | 2x | Enzymatics |
Y9420L | 5x ER/A-Tailing Enzyme Mix | 24 reactions | N/A | Enzymatics |
Y9380L | E. coli Pyrophosphatase | 50 U | 100 U/mL | Enzymatics |
Y9030L | E. coli Single-Stranded DNA Binding Protein | 1.5 mg | 2.75 mg/ml | Enzymatics |
Y9140-HC-L | End-Repair Mix (High Concentration) | 75 Reactions | 1 Rxn/µL | Enzymatics |
Y9140-LC-L | End-Repair Mix (Low Concentration) | 200 Reactions | 1 Rxn/µL | Enzymatics |
Y9080L | Endonuclease VIII | 10,000 U | 10,000 U/ml | Enzymatics |
P7600L | EnzScript™ (MMLV Reverse Transcriptase RNase H-) | 10,000 U | 200,000 U/mL | Enzymatics |
X8010L | Exonuclease I | 30,000 U | 20,000 U/ml | Enzymatics |
X8020L | Exonuclease III | 50,000 U | 100,000 U/ml | Enzymatics |
P7010-HC-L | Klenow (3′→ 5′ exo-) (High Concentration) | 10,000 U | 50,000 U/ml | Enzymatics |
P7010-LC-L | Klenow (3′→ 5′ exo-) (Low Concentration) | 10,000 U | 5,000 U/ml | Enzymatics |
P7060L | Klenow Fragment | 2,500 U | 5,000 U/ml | Enzymatics |
X8030L | Lambda Exonuclease | 10,000 U | 5,000 U/ml | Enzymatics |
P7040L | M-MuLV Reverse Transcriptase | 100,000 U | 200,000 U/ml | Enzymatics |
P7090L | Mako DNA Polymerase (3′→ 5′ exo-) | 3,000 U | 30,000 U/ml | Enzymatics |
P7140-HC-L | Manta 1.0 DNA Polymerase (High Concentration) | 100,000 U | 400,000 U/ml | Enzymatics |
P7140-LC-L | Manta 1.0 DNA Polymerase (Low Concentration) | 100,000 U | 40,000 U/ml | Enzymatics |
P7610L | NGS Library Prep: 2X VeraSeq™ PCR Mix – 250 Reactions | 250 Reactions | 2X | Enzymatics |
P7590L | Phoenix™ Hot Start Taq DNA Polymerase | 500 U | 5,000 U/ml | Enzymatics |
P7460L | Poly(A) Polymerase | 1,000 U | 5,000 U/mL | Enzymatics |
Y9260L | RecA | 1.5 mg | 2.0 mg/mL | Enzymatics |
Y9220L | RNAse H | 5,000 U | 5,000 U/ml | Enzymatics |
Y9240L | RNAse Inhibitor | 20,000 U | 40,000 U/ml | Enzymatics |
L6010L | T3 DNA Ligase | 900,000 U | 3,000,000 U/ml | Enzymatics |
L6030-LC-L | T4 DNA Ligase | 150,000 U | 120,000 U/ml | Enzymatics |
L6030-HC-L | T4 DNA Ligase (Rapid) | 240,000 U | 600,000 U/ml | Enzymatics |
P7080L | T4 DNA Polymerase | 2,000 U | 3,000 U/ml | Enzymatics |
Y9130L | T4 Gene 32 Protein | 1.0 mg | 10 mg/mL | Enzymatics |
Y9040L | T4 Polynucleotide Kinase | 10,000 U | 10,000 U/ml | Enzymatics |
L6050L | T4 RNA Ligase 1 | 10,000 U | 20,000 U/ml | Enzymatics |
L6080L | T4 RNA Ligase 2 | 4,500 U | 30,000 U/ml | Enzymatics |
L6070L | T4 RNA Ligase 2 Truncated | 500 U | 5,000 U/ml | Enzymatics |
L6020L | T7 DNA Ligase | 900,000 U | 3,000,000 U/ml | Enzymatics |
P7260L | T7 DNA Polymerase | 3,500 U | 10,000 U/ml | Enzymatics |
P7180L | T7 RNA Polymerase | 50,000 U | 50,000 U/ml | Enzymatics |
L6060L | Taq DNA Ligase | 20,000 U | 40,000 U/ml | Enzymatics |
P7110L | Taq DSC 2.0 DNA Polymerase | 1,250 U | 5,000 U/ml | Enzymatics |
P7250L | Taq-B DNA Polymerase | 10,000 U | 5,000 U/ml | Enzymatics |
P7620L | TaqIT | 5,000 U | 50,000 U/mL | Enzymatics |
P7070L | Terminal deoxynucleotidyl Transferase (TdT) | 6,000 U | 20,000 U/ml | Enzymatics |
G5020L | Thermolabile UDG | 500 U | 1,000 U/ml | Enzymatics |
Y9370L | Thermostable Pyrophosphatase | 1,250 U | 2,000 U/ml | Enzymatics |
G5010L | Uracil DNA Glycosylase | 10,000 U | 2,000 U/ml | Enzymatics |
P7511L | VeraSeq™ 2.0 High-Fidelity DNA Polymerase | 500 U | 2,000 U/ml | Enzymatics |
P7520L | VeraSeq™ ULtra DNA Polymerase | 500 U | 2,000 U/ml | Enzymatics |
L6030-W-L | WGS Ligase | 24 Reactions | N/A | Enzymatics |
P7640L | ZipScript™ One-Step RT-qPCR Kit | 1000 Reactions | N/A | Enzymatics |
P7020-HC-L | φ29 DNA Polymerase (High Concentration) | 2,000 U | 100,000 U/ml | Enzymatics |
P7020-LC-L | φ29 DNA Polymerase (Low Concentration) | 2,000 U | 10,000 U/ml | Enzymatics |
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