名稱(chēng)：線性PEI轉(zhuǎn)染試劑,

化學(xué)名: 線性聚乙烯亞胺,

cas號(hào)：9002-98-6

分子量：25KD

用途：用于轉(zhuǎn)染核酸到哺乳動(dòng)物細(xì)胞

產(chǎn)品編號(hào)：78002qf01  78002qf02  78002qf03

包裝規(guī)格：1 mL / 50 mL / 500 mL

儲(chǔ)存條件：4℃~8℃密閉保存，可保持穩(wěn)定至少 12 個(gè)月，常溫運(yùn)輸。 ?

產(chǎn)品概述 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑是一種陽(yáng)離子聚合物，分子量25000，它能與核酸形成復(fù)合物，并使該復(fù)合 物進(jìn)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞。線性PEI轉(zhuǎn)染試劑廣泛適用于常見(jiàn)細(xì)胞系，如 HEK-293、HEK293T、 Hep G2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3 和 Sf9 等。該試劑即使在有血清存在的情況下， 它仍然能的將核酸導(dǎo)入細(xì)胞。 78bio公司提供的 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑具有如下優(yōu)點(diǎn)： *的轉(zhuǎn)染效率 , 重組蛋白的高表達(dá)水平 ,與含血清的培養(yǎng)基相兼容, 低細(xì)胞毒性 ,易于操作 ?

質(zhì)量控制 每批次線性PEI轉(zhuǎn)染試劑均經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)染測(cè)試。將 eGFP 表達(dá)質(zhì)粒（GeneCopoeia Cat.No. EX-EGFP-Lv01）用 EndoFectinTM-Plus 轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)入亞融合狀態(tài)的 HEK-293 細(xì)胞，轉(zhuǎn)染 16 h 后， 超過(guò) 95%的細(xì)胞表達(dá) eGFP。 ?

注意事項(xiàng)

質(zhì)粒質(zhì)量：請(qǐng)務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級(jí)無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒（推薦使用QIAGEN或者MN公司去內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試劑盒）。通過(guò) 260 nm 光吸收測(cè)定 DNA 濃度，260 nm / 280 nm 比值確定 DNA 純度（比值應(yīng)該在 1.8~2.0 的范圍之內(nèi)）。如有可能，請(qǐng)通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè) 質(zhì)粒的完整性。

細(xì)胞條件：使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞。確保培養(yǎng)基沒(méi)有被細(xì)菌、真菌或支原體污染。如果 細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞，請(qǐng)?jiān)谵D(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細(xì)胞。 ?

瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法

1. 接種細(xì)胞： 轉(zhuǎn)染前一天，用膠原酶消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細(xì)胞濃度，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿，總體積如表 1 所示，每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到 70~80%。

2. 準(zhǔn)備 DNA-PEI 復(fù)合物： DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表 1 所示，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他適合的無(wú)蛋白培養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 2-5 μL 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液 的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請(qǐng)勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí)，請(qǐng)用圓底聚丙 烯管，例如 Falcon  5 mL /14 mL 離心管。

3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞： 直接向每個(gè)孔中加入 DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無(wú)血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí)，去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基，替換成無(wú)血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染 3 h 后，添加?體積的包含 30%血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

4. 孵育細(xì)胞和分析結(jié)果： 在 CO2培養(yǎng)箱中 37℃下孵育細(xì)胞至可以分析檢測(cè)。轉(zhuǎn)染后zui快 7 h 即可檢測(cè)到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)。 請(qǐng)自行確定檢測(cè)時(shí)間。 ?

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法

1. 接種細(xì)胞： 轉(zhuǎn)染前一天，用胰酶消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)。調(diào)整細(xì)胞濃度，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿，總體積如表 1 所示，每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到 70~80%。

2. 準(zhǔn)備 DNA-PEI 復(fù)合物： DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表 1 所示，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他適合的無(wú)蛋白培養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 2-5 μL 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液 的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請(qǐng)勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí)，請(qǐng)用圓底聚丙 烯管，例如 Falcon  5 mL /14 mL 離心管。

3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞： 直接向每個(gè)孔中加入 DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無(wú)血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí)，去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基，替換成無(wú)血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染 3 h 后，添加?體積的包含 30%血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

4. 孵育細(xì)胞和分析結(jié)果： 在 CO2培養(yǎng)箱中 37℃下孵育細(xì)胞至可以分析檢測(cè)。轉(zhuǎn)染后zui快 7 h 即可檢測(cè)到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)。

5.轉(zhuǎn)染 24 h 后，將細(xì)胞傳代至新鮮的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中（將細(xì)胞稀釋 10 倍 以上），在 CO2培養(yǎng)箱中 37℃孵育過(guò)一晚。第二天加入與轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的篩選藥物。約 1~2 周可 篩選到耐藥性克隆，在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。 ?

特別提醒

1. 對(duì)于某些類(lèi)型的細(xì)胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 和 COS 細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著 提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板，可適當(dāng)降低鋪板密度，以確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞 的匯合度仍為 70~80%。

2. 對(duì)于接觸抑制敏感的細(xì)胞，可適當(dāng)降低鋪板密度。

3. 即使在有蛋白（如 10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞，但是 DNA-PEI復(fù)合物必須在無(wú)蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用 Opti-MEM ITM 培養(yǎng) 基以達(dá)到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無(wú)蛋白培養(yǎng)基則需測(cè)試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。

4. 對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)而言，每 1 μg DNA 使用 3.0 μL EndoFectinTM 試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用 者也可嘗試每 1 μg DNA 使用 1~4 μL 體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化。

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